基因?qū)雰x是一個(gè)更廣義的概念，它指的是用于將外源基因?qū)肽繕?biāo)生物體中的任何工具或方法。這些工具和方法可以包括不同種類(lèi)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，如電轉(zhuǎn)染、化學(xué)轉(zhuǎn)染、微粒轟擊等。
細(xì)胞電轉(zhuǎn)染（電轉(zhuǎn)），也叫細(xì)胞電穿孔 (electroporation)，是把外源大分子物質(zhì)DNA、RNA、siRNA、蛋白質(zhì)等以及一些小分子導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)部的重要方法。
在瞬間強(qiáng)大電場(chǎng)的作用下，溶液中細(xì)胞的細(xì)胞膜具有了一定的通透性，帶電的外源物質(zhì)以類(lèi)似電泳的方式進(jìn)入細(xì)胞膜。由于細(xì)胞膜磷脂雙分子層的電阻很大，細(xì)胞外部電流場(chǎng)產(chǎn)生的細(xì)胞兩極電壓都被細(xì)胞膜承受，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)分到的電壓可以忽略不計(jì)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)部幾乎沒(méi)有電流，因此也決定了正常范圍內(nèi)的電轉(zhuǎn)過(guò)程中細(xì)胞毒性很小。電場(chǎng)使DNA等物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞膜后只能停止在細(xì)胞膜附近，隨后細(xì)胞本身的機(jī)制可以允許這些物質(zhì)到細(xì)胞核等處。
由于電轉(zhuǎn)技術(shù)依靠的是物理方法，細(xì)胞表面的分子特性對(duì)電轉(zhuǎn)影響比較小。相比化學(xué)轉(zhuǎn)染方法和病毒載體轉(zhuǎn)染方法，電轉(zhuǎn)可以用在所有的細(xì)胞種類(lèi)上，而且容易定量控制。
基因?qū)雰x的基本使用步驟
1. 準(zhǔn)備工作：確保使用前進(jìn)行必要的消毒和清潔操作。檢查導(dǎo)入儀的所有部件和配件是否完好無(wú)損。
2. 準(zhǔn)備目標(biāo)細(xì)胞：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，準(zhǔn)備目標(biāo)細(xì)胞的培養(yǎng)物。確保細(xì)胞處于最佳生長(zhǎng)狀態(tài)，適合進(jìn)行基因?qū)搿?/span>
3. 準(zhǔn)備外源基因：準(zhǔn)備需要導(dǎo)入的外源基因片段。這可以是通過(guò)PCR擴(kuò)增得到的DNA片段、合成的基因序列、質(zhì)粒等。
4. 設(shè)置導(dǎo)入條件：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，調(diào)整導(dǎo)入儀的參數(shù)，如電壓、電極間距、脈沖數(shù)量和脈沖寬度等。這些參數(shù)會(huì)根據(jù)目標(biāo)細(xì)胞的特性和基因?qū)敕秶牟煌兴兓?/span>
5. 轉(zhuǎn)染操作：將目標(biāo)細(xì)胞與外源基因混合或處理，確保外源基因充分與目標(biāo)細(xì)胞接觸。根據(jù)導(dǎo)入儀的類(lèi)型，可以選擇合適的轉(zhuǎn)染方法，如電轉(zhuǎn)染、化學(xué)轉(zhuǎn)染或微粒轟擊。
6. 應(yīng)用導(dǎo)入條件：根據(jù)設(shè)置好的導(dǎo)入條件，施加電場(chǎng)、化學(xué)誘導(dǎo)劑或微粒轟擊等。確保導(dǎo)入過(guò)程以及轉(zhuǎn)染條件的控制時(shí)間恰當(dāng)。
7. 恢復(fù)細(xì)胞：根據(jù)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞類(lèi)型，選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基和條件，進(jìn)行培養(yǎng)和恢復(fù)期，以使細(xì)胞適應(yīng)導(dǎo)入后的變化。
8. 檢測(cè)和分析：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，可以使用合適的方法，如PCR、Western blot、流式細(xì)胞術(shù)等進(jìn)行外源基因的表達(dá)和分析。
需要注意的是，使用基因?qū)雰x時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)操作指南和相關(guān)的生物安全規(guī)定。不同類(lèi)型的基因?qū)雰x可能有不同的使用步驟和注意事項(xiàng)，請(qǐng)根據(jù)具體的設(shè)備說(shuō)明書(shū)和實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行操作。
